Тест иммунохроматографический для выявления гемоглобина в кале (скрытая кровь)

Назначение

Тест «РЭД скрытая кровь» предназначен для in vitro одноэтапного быстрого качественного выявления гемоглобина (скрытой крови) в кале.

Краткая информация

Анализ кала на скрытую кровь используют для выявления различных видов патологии нижних отделов желудочно-кишечного тракта, характеризующихся кровотечениями (полипы толстого кишечника, колоректальный рак, болезнь Крона, язвенный колит). Сосуды на поверхности колоректального полипа или злокачественного новообразования часто бывают хрупкими и легко повреждаются при прохождении каловых масс. При этом в фекалии выделяется небольшое количество крови, которое редко заметно на глаз.

Тест «РЭД скрытая кровь» проявляет высокую чувствительность и специфичность в выявлении кровотечений на уровне ободочной и прямой кишки, в то же время нечувствителен к скрытым кровотечениям в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, где белковая часть гемоглобина подвергается перевариванию.

Принцип метода

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце гемоглобина он вступает в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против гемоглобина, меченными окрашенными частицами, и продолжает движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале гемоглобина.

В том случае, если в анализируемом образце присутствует гемоглобин, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце гемоглобина на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.

Состав

Один комплект тестов «РЭД скрытая кровь» включает:

• тест-полоски иммунохроматографические «РЭД скрытая кровь» в кассетах из пластика белого цвета – 5, 10 или 20 шт.;
• пробирки с крышкой-капельницей и стержнем для забора образца кала, содержащие буфер для растворения образца – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
• этикетки на клеевой основе для маркировки пробирок пользователем – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
• инструкцию по применению теста «РЭД скрытая кровь» – 1 шт.

Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.

Комплект тестов «РЭД скрытая кровь» упакован в картонную коробку.

Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора

• контейнеры для сбора образцов кала;
• одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
• часы или таймер.

Аналитические характеристики

• Чувствительность теста «РЭД скрытая кровь» составляет >99%.
• Специфичность теста «РЭД скрытая кровь» составляет >99%.
• Время проведения анализа – 10 мин.

Тест «РЭД скрытая кровь» специфичен по отношению к гемоглобину человека и не дает перекрестных реакций с гемоглобином и миоглобином животного происхождения, поступающими с пищей.

Каждый тест «РЭД скрытая кровь» предназначен для одного определения наличия гемоглобина (скрытой крови) в кале человека.

Меры предосторожности

Тест «РЭД скрытая кровь» предназначен только для in vitro диагностики.

Все компоненты теста «РЭД скрытая кровь» в используемых концентрациях являются нетоксичными.

Не следует использовать тесты «РЭД скрытая кровь» после истечения срока годности.

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Анализируемые образцы

Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.

Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер.

Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.

Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.

Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.

Подготовка образцов

1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в образец 3 раза, собрав примерно 100 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, пипеткой отобрать 100 мкл.

2. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).

3. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).

Проведение анализа

Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД скрытая кровь» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С).

4. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы.

5. Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД скрытая кровь», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.

6. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД скрытая кровь».

7. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала гемоглобина (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала гемоглобина (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации гемоглобина в образце.

В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД скрытая кровь».

Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД скрытая кровь».

Образцы кала, забранные у пациентов с кровоточащим геммороем, запорами, а также в период менструации, могут показать ложноположительные результаты.

Результаты, полученные с использованием теста «РЭД скрытая кровь», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.

Условия хранения и эксплуатации

Тесты «РЭД скрытая кровь» должны храниться при температуре от 2 до 25°С в упаковке предприятия-изготовителя в сухом месте в течение всего срока годности. Замораживание тестов «РЭД скрытая кровь» не допускается.

Срок годности тестов «РЭД скрытая кровь» – 24 мес. с даты изготовления.

После вскрытия упаковки тесты «РЭД скрытая кровь» должны быть использованы в течение 2 ч при хранении в сухом месте при комнатной температуре.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению теста «РЭД скрытая кровь».

Тест-набор иммунохроматографического одноэтапного качественного определения скрытой крови в кале.

Желудочно-кишечные заболевания, такие как рак толстой кишки, язвы, полипы, колиты, дивертикулиты и трещины прямой кишки, на ранних этапах развития могут не вызывать никаких видимых симптомов. Их обнаружение в этот период затруднительно.
Простым и надежным способом диагностики в этом случае может служить выявление скрытой крови в кале (FOB).

Состав:

• планшет индивидуальный, упакованный в индивидуальную вакуумную упаковку из алюминиевой фольги с осушителем,
• пипетка с кон-тейнером для внесения образца,
• реагент для разведения образца фекалий.

Чувствительность: 50 нг/мл или 6 мкг в 1 грамме фекалий.
Время проведения анализа: 5 минут.
Один планшет предназначен для одного определения.

Срок годности: 24 месяца.

КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

Проведение анализа

1. Перед началом определения все анализируемые образцы сыворотки (плазмы) или цельной крови должны быть выдержаны при комнатной температуре (+18 - 25 о С) в течении времени не менее 20 минут.

2. Открыть флакон с реагентом для разведения образца.

3. Отобрать пробу фекалий палочкой для забора проб, поместить ее во флакон, закрыть крышку и встряхнуть для перемешивания пробы и буфера.

4. Вскрыть упаковку планшета, извлечь планшет и поместить его на чистую поверхность тестовой зоной вверх.

5. Внести 5 капель (~ 120 мкл) в круглое окошко планшета, маркированное S (Sample).

6. Через 5 минут (но не позднее 10 минут) визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов анализа

Выявление в тестовой зоне планшета 2-х параллельных полосок розового цвета на уровне маркировок Т и С свидетельствует о положительном результате анализа.

Выявление в тестовой зоне планшета 1-й линии красного цвета на уровне маркировки С свидетельствует об отрицательном результате анализа.

В том случае, когда в тестовой зоне линия красного цвета на уровне маркировки С отсутствует или же выявляется одна линия красного цвета на уровне маркировки Т результат анализа является недействительным и определение необходимо проводить с использованием другого планшета.

Условия хранения и эксплуатации

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2 - 30 о С в сухом месте в течении всего срока годности. Замораживание компонентов набора не допускается.

Срок годности набора 24 месяца.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению.

Каталожный номер: 4091-3L Фасовка: 20 тестов/упаковка

Справка

Ежегодно в мире наблюдается более 600 000 случаев рака кишечника, который находится на третьем месте среди наиболее распространенных видов рака (1). Как при любой другой разновидности раковых заболеваний, обнаружение очагов на ранней стадии существенно повышает коэффициент выживания пациентов (2). Среди людей старше 45 лет, 10% имеют колоректальные полипы, из которых 1% становится злокачественными (3). На основании того факта, что многие полипы более 0,5 см могут кровоточить, тестирование скрытой крови в фекалиях представляется простым и дешевым скрининговым методом для диагностики рака кишечника по сравнению с колоноскопией. В течение многих лет использовались химические методики, основанные на псевдопероксидазной активности гемоглобина, недостатками которых являлись низкая чувствительность и недостаточная специфичность (4). В настоящее время начинают использовать иммунологические методы с улучшенной чувствительностью и специфичностью по отношению к человеческой крови, несмотря на их большую техническую сложность по сравнению с другими тестами (5). Недавно было подтверждена прямая связь между концентрацией гемоглобина в фекалиях и колоректальным раком (6).

Предназначение и принцип метода

Количественный иммунохроматографический экспресс-тест для обнаружения скрытой крови в фекалиях. Метод определения основан на использовании специфического комплекса конъюгированных с красителем мышиных моноклональных антител к человеческому гемоглобину и иммобилизованных в тестовой зоне кассеты моноклональных мышиных антител к человеческому гемоглобину для его селективной идентификации с высокой степенью чувствительности и специфичности. После взятия пробы специальным шприцем с раствором для экстракции несколько капель полученного экстракта фекалий вносят в лунку для проб тестовой кассеты. При прохождении тестируемой пробы через слой адсорбента меченый конъюгат антител с красителем связывается с гемоглобином человека, образуя комплекс антиген-антитело . Этот комплекс связывается в реакционной зоне с антителами к гемоглобину с образованием полосы розового цвета. В отсутствие гемоглобина линии не образуется. Продолжая продвигаться по слою адсорбента, несвязанный конъюгат связывается с реагентами в контрольной зоне с образованием контрольной полосы, свидетельствующей о реакционной способности теста. В зависимости от концентрации крови в тестовом окне появляются линии различной интенсивности, что позволяет количественно измерить гемоглобин при помощи иммунохроматографического экспресс-анализатора «Easy Reader»(VEDALAB).

Состав

Тестовые кассеты 20

Устройства для сбора проб (шприц с 2 мл раствора для экстракции) 20

Инструкция 1

Стабильность и хранение

1. Хранить при температуре от 4 до 30°C в герметичной фабричной упаковке.

2. Не замораживать!

3. Тест стабилен до истечения срока хранения, указанного на этикетке.

Меры предосторожности

Данный тест предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с пробами пользоваться защитной одеждой и одноразовыми перчатками.

Не принимать пищу, не пить и не курить в помещении, где выполняется работа с пробами.

При взятии и тестировании проб не прикасаться руками к слизистой оболочке глаз и носа.

Не использовать тестовую кассету, если её защитная упаковка повреждена.

Не использовать тестовую кассету с истекшим сроком хранения.

Раствор для экстракции может вызывать раздражение кожи, глаз и слизистых оболочек. При попадании раствора на кожу следует немедленно смыть его водой.

Обезвреживание отходов

Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5–1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа.

Подготовка реагента

Все реагенты готовы к использованию.

Исследуемые пробы

Экстракт фекалий.

Взятие и подготовка проб

1.Написать фамилию, возраст, адрес пациента и дату взятия пробы на этикетке устройства для сбора проб.

2.Открыть верхнюю часть устройства для сбора проб, где находится зонд для сбора проб.

3.Взять пробу стула с помощью верхней части устройства для сбора проб, погрузив ее в 3 разных местах одной и той же пробы стула, и поместить в устройство.

4.Поместить зонд для сбора проб, загруженный пробой, обратно на его место в устройстве для сбора проб и плотно привинтить пробку.

5.Хранить устройство для сбора проб при температуре 2-8°C.

Процедура тестирования

1. Довести все пробы и тестовые кассеты до комнатной температуры.

2. Извлечь тестовую кассету из защитной упаковки.

3. Отломить кончик устройства для сбора проб, выдавить по капле 6 полных капель экстрагированной пробы (150 мкл) в лунку для проб на тестовой кассете, давая впитываться предыдущей капле.

4. Результаты теста в нг/мл считываются на приборе «Easy Reader» через 10 минут после внесения пробы.

Подробное описание работы на ридере дано в инструкции к прибору.

Характеристики теста

а) Диапазон измерения

Количественный результат теста выражается в нг гемоглобина на мл экстрагирующего раствора. Линейный диапазон результатов находится в пределах от 10 до 500 нг/мл, диапазон приведен в таблице:

б) Точность

Исследование было проведено на панели из 24 проб фекалий, представленной госпиталем Брэдфорда (Великобритания) по Йоркширской системе внешнего контроля качества (YEQAS). Эти образцы, содержащие гемоглобин в известной концентрации (в мг/г фекалий) были протестированы качественным визуальным экспресс-тестом и данным количественным тестом. Полученные результаты свидетельствуют о полной корреляции между результатами. Кроме того, количественные результаты хорошо коррелируют с количеством гемоглобина (данные YEQAS в мг/г фекалий). Во всех случаях образцы были точно идентифицированы как негативные (<10 нг/мл), пограничные (10-25 нг/мл) и позитивные (500-5,000 нг/мл).

в) Чувствительность

Концентрации, близкие к 5 нг/мл определяются прибором. В этом случае результат показывается как «<10 ng/ml». Результаты выше 100 нг/мл рассматриваются как патологические.

г) Эффект высокой дозы (хук-эффект)

Хук-эффект не наблюдался вплоть до 2 мг/мл благодаря патентованному методу VEDALAB.

д) Перекрестная реактивность:

Тест не показал перекрестных реакций с бычьим, свиным, кроличьим, лошадиным и бараньим гемоглобином.

е) Воспроизводимость:

При тестировании двух коммерческих образцов с концентрацией скрытой крови 3,35 и 26,67 нг/мл в 25 повторах коэффициент вариации результатов составил 8,5% и 11,4% соответственно.

ж) Диагностическая значимость

Как сказано ниже (см. «Ограничения метода»), существует множество причин присутствия крови в фекалиях, и врач должен подтвердить результаты данного теста другими клиническими методами, например, колоноскопией.

При тестировании 54 образцов фекалий было установлено, что результаты ниже 100 нг/мл следует трактовать как негативные, от 100 до 200 нг/ил как пограничные и свыше 200 нг/мл как позитивные. Тем не менее, при наличии другой симптоматики необходимо дополнительное обследование, даже если выявленная концентрация будет ниже 100 нг/мл.

Ограничения метода

1. Тест предназначен для количественного определения человеческой крови (гемоглобина) в фекалиях.

2. Наличие крови в стуле может быть вызвано несколькими причинами, помимо рака кишечника, такими как геморроидальные узлы, кровь в моче или раздражение желудка. Кровотечение из верхней части пищеварительного тракта (например, в случае язвы желудка или двенадцатиперстной кишки) может не обнаруживаться постоянно по причине переваривания белков и трудности для распознания антителами антигена гемоглобина после протеолиза.

3. Не все кишечные кровотечения могут быть вызваны предраковыми или раковыми полипами.

4. Как и в случае всякой диагностической процедуры, врач должен подтвердить данные, полученные с использованием этого теста, с помощью других клинических методов, таких как клизма с барием, сигмоидоскопия или колоноскопия.

5. Отрицательные результаты не исключают кровотечения, поскольку оно может быть непостоянным.

6. Колоректальные полипы на очень ранней стадии заболевания могут не кровоточить. По этой причине для надежности рекомендуется периодически (раз в год) проверять людей старше 45 лет.

7. Тест предназначен только для считывания на приборе «Easy Reader». Тест не предназначен для визуального считывания.

8. При несоблюдении времени считывания (10 минут) могут наблюдаться ложные результаты.

9. Как это наблюдается и в других методах анализа, имеется некоторая вариабельность результатов измерений. Поэтому для клинических данных рекомендуется вводить коэффициент вариации +/- 25% по отношению к полученному результату.

Экспресс тест на скрытую кровь в кале позволяет выявить наличие скрытого кровотечения, с чувствительностью 2 мг гемоглобина на 100 мл воды. Это позволяет в домашних условиях определить наличие кровоточивости в просвет кишечника, не определимой глазом.

Самый эффективный и достоверный тест выпускает американская компания “Biomerica” – “EZ Detect” . На тест-полоску наносится хромофильный краситель тетраметилбензидин, при попадании на который гемоглобина происходит изменение его цвета. При этом в крестообразном окошке происходит изменение цвета на голубой или зеленый. Такой тест можно заказать только через интернет-магазины.

Есть отечественный бюджетный аналог, не такой точный, но зато его можно приобрести практически во всех аптечных пунктах. Выпускает этот тест компания «Мед-экспресс диагностика» под названием «Будьте уверены» .

Также на отечественных рынках можно приобрести Cito Test FOB для выявления скрытой крови в кале. Компания специализируется на экспресс диагностики онкологической патологии, поэтому тесту можно доверять.

Таблица 1. Список экспресс-тестов на наличие скрытой крови в кали

Какие заболевания позволяет выявить?

• – наиболее частая причина появления скрытой крови;
• – доброкачественное заболевание, которое также может давать скрытые кровотечения при микротравматизации полипа химусом;
• – кровотечение чаще явное;
• – чаще клинически проявляется наличием прожилок крови в кале.

Тест определяет лишь факт наличия крови, конкретное заболевание можно выявить только с помощью обследования – и прочих.

• старше 40 лет, в особенности обладающими вредными привычками (алкоголизм, курение);
• с отягощенным семейным анамнезом по раку кишечника;
• с метаболическим синдромом (абдоминальный тип ожирения);
• с «сидячим» образом жизни (офисные работники, водители транспортных средств и т.д.);
• с нарушением стула со склонностью к запорам;
• с предраковыми заболеваниями кишечника (полипоз, аутоиммунные воспалительные заболевания и так далее).

Подготовка и проведения теста

Перед проведением теста необходимо помнить следующие аспекты:

Тест проводится следующим образом:

1. Отвинтить крышечку сборника.
2. Извлечь аппликатор.
3. Проследить, что бы реагент, находящийся внутри сборника, не пролился.
4. Погрузить аппликатор в 3-5 участков анализируемого кала.
5. Излишки кала удалить сухой салфеткой с поверхности аппликатора.
6. Опустить аппликатор в сборник с реагентом.
7. Интенсивно встряхнуть сборник для равномерного перемешивания кала с реагентом.
8. Вскрыть планшет вдоль прорези.
9. Положить на плоскую ровную сухую поверхность тестовой зоной вверх.
10. Перевернуть сборник.
11. Отвинтить крышку (шпенек-пробку).
12. Капнуть 2 капли реагента на окошко тест-пластины.
13. Выждать 5 минут перед оценкой результата.

Расшифровка

Тест положительный

Появление двух окрашенных полосок в окошке тест-ситемы. Любая интенсивность окраски свидетельствует о том, что в кале есть скрытая кровь, интенсивность цвета зависит от количества гемоглобина.

После получения положительного результата необходимо в срочном порядке обратиться к врачу для дальнейшего обследования: анализы крови, ирригография, колоноскопия и другие исследования по усмотрению врача. Чем раньше будет проведено обследование и начато лечение рака, тем больше вероятность успешного исхода и увеличения выживаемости.

Тест отрицательный

Окрашена только одна линия в контрольной области С, тестовая полоска Т – остается чистой.

Если тест проводился в качестве скрининговой диагностики при наличии клинических проявлений, лучше все же обратиться к специалисту и пройти более точные исследования (см. ) для определения причин появления жалоб. Если тест проводился как ежегодная скрининговая диспансеризация (как флюорография) после 40 лет, то можно повторить тест через год.

Выводы

Мировая практика утверждает, что эффективность данного теста неоспорима. Могут встречаться погрешности, более точным исследованием для диагностики рака кишечника на начальных этапах является .

При наличие клинических проявлений и жалоб, необходимо обратится к врачу. Специалист сам может в качестве скрининга порекомендовать экспресс-тест на скрытую кровь. Чем раньше будет поставлен диагноз, тем более вероятно своевременное и эффективное лечение.